氨基柱是同时可以用于正相和反相条件的一种色谱柱。。但正相溶剂和反相溶剂是不互溶的,,,这一点不可忽略。。关于新购柱子,,,首先请注重翻开剖析测试说明书,,,相识柱子的生涯溶剂。。若是生涯溶剂与你将要使用的流动相极性差别不会互溶,,,请先用异丙醇过渡。。过渡历程中注重因异丙醇粘度较大,,,会导致柱压很高,,,适当调低流速。。若是流动相中尚有缓冲盐类,,,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,,,阻止缓冲盐的析出。。
柱效检测: 流动相:10%乙酸乙酯+90%正己烷 流速1.0
标准溶液:乙苯(或甲苯)+苯甲酸甲酯
检测波长254nm
这个要领特殊适用于新购柱子(新购柱子往往生涯在正相溶剂中)时即举行检测,,,若有问题,,,可实时与供应商相同。。
(1) 平时在正相条件下使用:
首先用50倍柱体积的异丙醇洗濯,,,因异丙醇粘度较大需适当放低流速;;之后,,,用50倍的甲醇洗濯;;之后,,,用异丙醇过渡回到寻常使用的正相流动相,,,即可。。
(2)平时在反相条件下使用:
缓冲盐应实时冲洗,,,不可直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等,,,属知识就不作特殊交待。。
用50倍纯甲醇冲洗;;之后,,,用异丙醇过渡后,,,用二氯甲烷冲洗色谱柱;;之后,,,再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。。
这些洗濯要领,,,主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处置惩罚要领,,,色谱柱体现行为为诸如柱压增高柱效降低等。。
一样平常C18或C8反相色谱柱,,,不可用纯水冲洗,,,有机相比例至少5%,,,不然键合相碳链会爆发卷曲,,,导致色谱柱性能不稳固。。
若是是正相柱,,,是一定不可用水冲的,,,少少量的水都可能对色谱柱造成不可逆的损害。。
其他柱,,,
氨基柱由正相过渡到反相系统时,,,可以用碱性水溶液(pH不可过高,,,会水解)和纯水冲洗,,,
氨基柱一样平常不必纯水,,,但可以用乙腈等的水溶液冲柱,,,可是不可长时间冲。。氨基柱跟氰基柱在水相中都有水解问题,,,用在反相系统时需特殊注重pH值。。
氨基柱活化是指新装色谱柱在使用前要举行老化处置惩罚,,,其目的是取出残留的溶剂、水分和低沸点杂质,,,同时也使牢靠液在载体外貌形成匀称的膜。。