疏水色谱柱能够有用疏散抗体的结构同分异构体。。。。在抗体药物中,,,,,关于一些由于等电点相同而无法通过离子交流色谱法实现疏散的,,,,,但外貌疏水性有差别的结构同分异构体、或多聚体,,,,,可以思量使用疏水色谱法来举行剖析。。。。并且疏水色谱法也可以用于抗体降解产品的剖析。。。。
疏水色谱柱装置的准确办法如下:
1、使用新鲜清洁的水与乙腈。。。。冲洗系统,,,,,确保系统清洁,,,,,不含任何缓冲盐和污染物。。。。
2、取用色谱柱时阻止磕碰掉落。。。。
3、将疏水色谱柱入口端毗连到系统上,,,,,柱出口端先不要毗连,,,,,色谱柱身上有箭头标明准确流向。。。。
4、在0.1mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱,,,,,然后在2分钟内将流速升至0.5mL/min。。。。
5、当溶剂匀称的从柱出口端流出,,,,,停流速,,,,,将色谱柱出口端接到系统检测器上(这样可以阻止气泡进入检测系统,,,,,并且可快速抵达基线平衡)。。。。
6、重启流速,,,,,凭证办法4的要领逐渐提高流速,,,,,至通例剖析时所使用的流速。。。。
7、参考柱效测试报告中的要领,,,,,使用该流动相条件平衡色谱柱,,,,,通常需要使用5-10倍柱体积的流动相,,,,,直至压力与基线稳固。。。。
8、测试疏水色谱柱柱效。。。。若是没有柱效测试报告中的剖析物,,,,,请厂家部分追求支持,,,,,使用合适的浓度与进样量。。。。柱效效果略低于柱效测试报告属正常情形。。。。如效果显着偏低、峰形拖尾,,,,,提醒色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态,,,,,需要举行故障排查。。。。当使用2.1mm内径色谱柱时,,,,,建议优化系统以镌汰谱带展宽,,,,,包括:使用检测器微量流通池,,,,,镌汰进样器loop环体积,,,,,使用较小内径(如0.005''或0.12mm)的系统管路。。。。并确保管路与疏水色谱柱毗连适当、无死体积。。。。