色谱是一种疏散剖析手段,,,疏散是焦点,,,因此担负疏散作用的色谱柱是色谱系统的心脏。。
色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、讨论、螺丝等组成,,,其疏散效果取决于所选择的牢靠相,,,以及色谱柱的制备和操作条件。。
平时使用色谱柱的需要注重哪些地方呢???
1.阻止压力和温度的急剧转变及任何机械震惊。。温度的突然转变或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状态;;;;;柱压的突然升高或降低也会激动柱内填料,,,因此,,,在调理流速时应该缓慢举行,,,在阀进样时阀的转动不可过缓。。
2.应逐渐改变溶剂的组成,,,特殊是反相色谱中,,,不应直接从有机溶剂改变为所有是水,,,反之亦然。。
3.一样平常说来色谱柱不可反冲,,,只有生产者指明该柱可以反冲时,,,才可以反冲除去留在柱头的杂质。。不然反冲会迅速降低柱效。。
4.选择使用相宜的流动相(尤其是pH),,,以阻止牢靠相被破损。。有时可以在进样器前面毗连一预柱,,,剖析柱是键合硅胶时,,,预柱为硅胶,,,可使流动相在进入剖析柱之前预先被硅胶“饱和”,,,阻止剖析柱中的硅胶基质被消融。。
5.经常用强溶剂冲洗色谱柱,,,扫除保保存柱内的杂质。。在举行洗濯时,,,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡,,,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右。。
6.生涯色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,,,柱讨论要拧紧,,,避免溶剂挥发干燥。。绝对榨取将缓冲溶液留在柱内静置住宿或更长时间。。
7.色谱柱使用历程中,,,若是压力升高,,,一种可能是烧结滤片被梗塞,,,这时应替换滤片或将其取出举行洗濯;;;;;另一种可能是大分子进入柱内,,,使柱头被污染;;;;;若是柱效降低或色谱峰变形,,,则可能柱头泛起塌陷,,,死体积增大。。在后两种情形爆发时,,,小心拧开柱讨论,,,用清洁小钢将柱头填料取出1~2mm高度(注重把被污染填料取净)再把柱内填料整平。。然后用适当溶剂湿润的牢靠相(与柱内相同)填满色谱柱,,,压平,,,再拧紧柱讨论。。这样处置惩罚后柱效能获得改善,,,可是很难恢复到新柱的水平。。
8.新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷,,,使柱效下降,,,这时也可补加填料使柱效恢复。。每次事情完后,,,好用洗脱能力强的洗脱液冲洗。。