C18反相色谱柱是一种高效液相色谱柱，，，，在药物剖析、情形监测、食物清静检测等领域有着普遍的应用。。。。使用反相色谱手艺，，，，其原理是外貌修饰成疏水性的碳链（C18链）与待测物通过疏水作用相互作用，，，，实现看待测物的疏散和纯化。。。。详细来说，，，，C18反相色谱柱内部填充有一定巨细和形态的颗粒，，，，外貌涂层有一层碳链和疏水基团。。。。样品在经由样品预处置惩罚后，，，，通过进样器注入色谱柱中，，，，在柱内填充的颗粒外貌爆发反相作用，，，，非极性物质向柱内靠拢，，，，极性物质则倾轧柱内颗粒而向外逸散。。。。通过改变流动相的极性和离子强度等条件，，，，可以实现看待测物的选择性疏散和纯化。。。。
1、准备事情：
检查仪器装备是否正常运行，，，，确保柱子处于优异状态。。。。准备好所需的溶剂和移动相。。。。
新柱在使用前需举行处置惩罚。。。。配制好65%的乙腈/水溶液，，，，将色谱柱准确毗连在色谱仪上，，，，出口放空（注重出口端不可连上检测器，，，，以免污染），，，，以低流速0.1ml/min~0.5ml/min举行冲洗，，，，等望见柱子出口有液体流出后，，，，过20分钟再接上检测器，，，，以循序渐进的要领将流速调至1.0ml/min，，，，继续冲洗2~8小时。。。。
2、样品制备：
将待测样品消融于适当的溶剂中，，，，并举行须要的预处置惩罚，，，，如过滤、离心等。。。。
3、柱子装填：
将C18反相柱装入色谱柱架中，，，，毗连好进样系统和检测器。。。。
4、初始条件设置：
设置移动相组成和流速，，，，一样平常接纳梯度洗脱要领，，，，即最先时使用较弱的极性溶剂，，，，逐渐改变为较强的极性溶剂。。。。
5、进样：
将样品通过进样系统注入柱中，，，，注重坚持稳固的进样流速。。。。
6、色谱疏散：
最先举行色谱疏散，，，，凭证需求调解流速和梯度条件，，，，使差别组分获得有用疏散。。。。
7、数据收罗息争析：
使用检测器对柱出口的化合物举行检测和纪录，，，，获取响应的色谱图。。。。
8、效果剖析：
凭证色谱图举行效果剖析，，，，确定目的化合物的峰位置、峰高、峰面积等参数。。。。
9、色谱柱洗濯：
若是样品剖析中只用到一样平常的乙腈、甲醇和水的流动相，，，，做完样品后可直接用55%~65%乙腈/水或55%~65%甲醇/水冲洗色谱柱40~80分钟，，，，然后以纯甲醇或乙腈冲洗30分钟生涯。。。。
若是样品剖析中流动相里含有缓冲液或酸或离子对试剂，，，，做完样品后需先用5%的甲醇/水或5%的乙腈/水冲洗一小时以上（若是色谱柱更长，，，，则还需增添适其时间），，，，然后用55%甲醇/~水65%/水冲洗色谱柱30~60分钟，，，，最后用甲醇或乙腈以1ml/min流速冲洗30分钟。。。。
10、色谱柱再生：
当色谱柱使用较长时间后泛起柱压力升高、疏散度欠好、柱效降低、峰形欠好等情形时，，，，可举行再生。。。。先用5%甲醇/水或5%乙腈/水反向冲洗60分钟以上，，，，然后用四氢呋喃以1ml/min流速冲洗30分钟以上，，，，再用65%甲醇/水或65%乙腈/水以1ml/min流速冲洗60分钟，，，，最后用纯甲醇或乙腈冲洗30分钟生涯即可。。。。
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