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C18液相色谱柱使用历程中需要注重的事项

更新时间:2017-06-27浏览:5974次
C18柱是一种常用的反相色谱柱,,它以十八烷基硅烷键合硅胶为填料,,因此有较高的碳含量和更好的疏水性,,对种种类型的生物大分子有更强的顺应能力,,适用规模较广,,是液相色谱仪剖析中的色谱柱类型。。。。。

C18液相色谱柱使用注重事项:

1、新C18色谱柱在使用前,,须先用甲醇或乙腈试剂以20倍柱体积低流速冲洗,,作用是使牢靠相能充分润湿、碳链舒展*,,使色谱柱的性能抵达状态。。。。。详细操作是,,将配制好65%的乙腈/水冲洗后,,把色谱柱入口端毗连在色谱仪上,,出口端放空(不可连上检测器,,以免污染了检测器),,以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速将色谱柱中的清稀溶液吹干,,过20分钟后再接上检测器,,以1.0ml/min的流速,,继续冲洗2~8小时 ;;;;;
2、液相色谱仪检测剖析样品完毕后,,须冲洗色谱柱。。。。。尤其是流动相中含有酸或盐时,,需将色谱柱中的酸或盐冲洗清洁,,通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积 ;;;;; 
3、若色谱柱处于恒久闲置状态时,,要将色谱柱*冲洗,,建议冲洗3-4小时以上,,zui后生涯在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液(如90%甲醇水)中 ;;;;; 
4、由于C18柱的牢靠相疏水性较强,,在使用历程中只管不要使用高水相条件,,若水相比例过高易引起牢靠相疏水塌陷,,引起柱效迅速下降,,甚至造成不可逆的负面影响 ;;;;;由于碳载量高,,体现尤为显着,,建议使用历程中水相比例不凌驾90% ;;;;;
5、色谱柱压力升高、柱性能下降:通常为色谱柱被污染,,对色谱柱举行再生处置惩罚可恢复部分柱效 ;;;;;  
6、色谱柱压力骤升:通常由盐析出或筛板梗塞引起,,若是盐析出,,用10%甲醇水低流速冲 洗至压力恢复即可 ;;;;;若判断并非盐析出,,以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱(将色谱柱反接,,不接检测器),,若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效,,需寻找其他缘故原由。。。。。
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